マクロファージをリポ多糖で刺激して得た培養液を採取し、この培養液中のサイトカインＸの濃度をサンドイッチELISA（Enz…
薬学理論問題（生物） 第118問
マクロファージをリポ多糖で刺激して得た培養液を採取し、この培養液中のサイトカインＸの濃度をサンドイッチELISA（Enzyme︲linked immunosorbent assay）法で定量することにした。各試料をマイクロプレートに採取し反応を行った後、450 nm の吸光度を測定した。サイトカインＸの標準物質を用いて標準曲線（検量線）を作成したところ、下図のようになった。この測定に関する記述として適切なのはどれか。2つ選べ。
- (1)この培養液の測定値が吸光度1.5 であった場合、培養液を希釈して再測定することが必要である。
- (2)10 倍希釈した培養液の測定値が吸光度0.6 である場合、もとの培養液中のサイトカインＸ濃度は約600 pg/mL である。
- (3)培養液に含まれる別のサイトカインＹを測定するためには、サイトカインＸの測定とすべて同じ抗体を利用できる。
- (4)サンドイッチELISA 法では抗原に対する2 種類の抗体が使われるが、それぞれの抗体が認識するエピトープは異なる。
- (5)この培養液の測定で発色が検出限界以下だった場合、標準曲線（検量線）の測定の場合よりも反応時間を長めにしてもよい。
正答 (1)(4)
正答は (1)と(4)。吸光度1.5 は検量線の最高点（約0.93）を超えるので希釈して測り直し、サンドイッチ法の2種類の抗体は別のエピトープを認識します。
検量線は約1,000 pg/mL（吸光度約0.93）までしか作っていません。それより高い吸光度は直線の範囲の外なので、試料を希釈して検量線の範囲に入れてから測ります。サンドイッチ ELISA では、プレートに固定した捕捉抗体と標識した検出抗体で抗原をはさむので、2つの抗体が抗原の別の場所（エピトープ）に同時に結合できる必要があります。
【ほかの選択肢】
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(2) 吸光度0.6 は検量線から約600 pg/mL。10倍に希釈した試料の値なので、もとの濃度は約600×10＝約6,000 pg/mL 誤り
(3) サイトカインＹには、Ｙに特異的に結合する抗体の組が必要。Ｘ用の抗体は使えない 誤り
(5) 試料と検量線は同じ条件（反応時間・温度）で測らないと検量線が使えない。発色が弱いからと時間を延ばしてはいけない 誤り
【ポイント】
測定値は検量線の範囲の中で読み、希釈したときは希釈倍率を掛けて元の濃度に戻します。
出典：第110回 薬剤師国家試験 問118（厚生労働省 公表）出典元ページ
最終更新日
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