二次元電気泳動は、等電点電気泳動とSDS ポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS︲PAGE)を組み合せたもので、ある生体…
薬学理論問題(生物) 第114問
二次元電気泳動は、等電点電気泳動とSDS ポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS︲PAGE)を組み合せたもので、ある生体試料中の多種多様なタンパク質をそれぞれ固有の等電点と分子量の違いを利用して分離する方法である。図1 と図2は、二次元電気泳動の概要と実験結果を示したものである。図1 等電点電気泳動: pH 4 ~10 の連続的なpH 勾配を形成させた棒状のゲルを準備する。このゲルを用いて電気泳動すると、試料中の各タンパク質はそれぞれの等電点の位置までゲル中を移動する。(注: 実際にはこの段階ではゲルは染色しないためタンパク質は見えないが、図1 の下段では電気泳動後にタンパク質が等電点で分離しているイメージを示した。)図2 SDS︲PAGE: 等電点電気泳動により試料中のタンパク質を分離した棒状ゲルを、SDS︲PAGE の分離ゲルの上に移し、一次元目の等電点電気泳動と直角の方向に電気泳動する。タンパク質は、その分子量に応じた位置まで移動する。電気泳動の終了後、泳動用のガラス板から取り出したゲルを洗浄し、クマシーブリリアントブルーでタンパク質を染色したところ、50 個のスポットを検出した。図2 中のスポットAは、等電点5.8、分子量56,000 のタンパク質である。このようなタンパク質分析法とその実験結果に関する記述のうち、誤っているのはどれか。1つ選べ。
- (1)等電点が5.8 より小さく、かつ分子量が56,000 より大きいスポットは、4 つ検出されている。
- (2)スポットAのタンパク質では、中性溶液中での分子全体の電荷が負になる。
- (3)スポットBのタンパク質の等電点は、ほぼ5.8 である。
- (4)スポットCのタンパク質は、分子量56,000 より小さい。
- (5)タンパク質のスポットの位置は、リン酸化により、やや右上方向に移動すると推測される。
正答 (3)
正答は (3)。スポット B は A を通る横の線上にあり、分子量がほぼ56,000 で、等電点は A より左(アルカリ側)にあるため、5.8 ではありません。
図2の横軸は左が pH 10、右が pH 4 で、上ほど分子量が大きくなります。スポット A を通る縦の点線が等電点5.8、横の点線が分子量56,000 を示します。
【ほかの選択肢】
(1) 縦線より右(等電点が5.8 より小さい)で横線より上(分子量が56,000 より大きい)のスポットは4つ 正しい
(2) 中性(pH 7)は等電点5.8 より高いので、分子は H⁺ を失って全体として負に荷電する 正しい
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(4) スポット C は A の真下にあり、分子量は56,000 より小さい 正しい
(5) リン酸化で負の電荷が増えて等電点が酸性側(右)へ、分子量がわずかに増えて上へ移ると推測される 正しい
出典:第108回 薬剤師国家試験 問114(厚生労働省 公表)出典元ページ
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